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WB實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞樣本應(yīng)該如何處理

點(diǎn)擊次數(shù):5769     更新時(shí)間:2020-11-03

WB實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞樣本應(yīng)該如何處理

很多老師在做WB實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,經(jīng)常問(wèn)細(xì)胞樣本應(yīng)該如果處理,下面上海信帆技術(shù)小編給大家講解一下吧!

樣品處理及保存

1、懸浮細(xì)胞樣品:

把細(xì)胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復(fù)2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。

 

2、貼壁細(xì)胞樣品:


2.1 胰酶消化:用胰酶將細(xì)胞消化后,含血清的培養(yǎng)基中和胰酶,吹打,收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復(fù)2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。


2.2 細(xì)胞刮子收集細(xì)胞:對(duì)于某些蛋白(即對(duì)胰酶比較敏感或者實(shí)驗(yàn)特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后進(jìn)行WB檢測(cè)),直接用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞,連同培養(yǎng)基收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復(fù)2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。

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